實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)是目前應(yīng)用最為廣泛的核酸檢測(cè)技術(shù)。然而，由于主流熒光PCR儀器檢測(cè)通道數(shù)目的限制，單個(gè)反應(yīng)所能檢測(cè)的靶基因數(shù)目很難超過6個(gè)，限制了該技術(shù)在檢測(cè)涉及多靶點(diǎn)的復(fù)雜疾病上的應(yīng)用。
2月24日，廈門大學(xué)研究團(tuán)隊(duì)在《美國國家科學(xué)院院刊》(PNAS)雜志上發(fā)表了題為“Highly multiplex PCR assays by coupling the 5’-flap endonuclease activity of Taq DNA polymerase and molecular beacon reporters”的文章，研發(fā)出了一種稱為“MeltArray”的熒光PCR新技術(shù)，將熒光PCR的單管檢測(cè)能力提高了至少一個(gè)數(shù)量級(jí)。
該技術(shù)利用了熒光PCR反應(yīng)中Taq DNA聚合酶的5‘-瓣?duì)顑?nèi)切酶活性，將位于引物下游的“媒介探針”切割，釋放出“媒介引物”，“媒介引物”結(jié)合到反應(yīng)體系中的分子信標(biāo)報(bào)告探針上。在Taq酶聚合活性作用下，“媒介引物”沿著分子信標(biāo)延伸，生成具有特定熔點(diǎn)值的熒光雙鏈。由于每個(gè)分子信標(biāo)可以允許多個(gè)“媒介引物”形成一系列具有不同熔點(diǎn)值的熒光雙鏈，單個(gè)MeltArray多重?zé)晒釶CR反應(yīng)可檢測(cè)的總靶基因數(shù)目就等于反應(yīng)中分子信標(biāo)數(shù)量乘以其所容納的“媒介引物”數(shù)量。研究團(tuán)隊(duì)實(shí)現(xiàn)了單個(gè)熒光通道可檢測(cè)12個(gè)靶標(biāo)，6個(gè)熒光通道的儀器可檢測(cè)72個(gè)靶標(biāo)，這是單個(gè)閉管實(shí)時(shí)熒光PCR一步法目前所能檢測(cè)的最大靶基因數(shù)量。
該研究證實(shí)了MeltArray多重?zé)晒釶CR技術(shù)在不改變現(xiàn)有儀器設(shè)備的情況，在遺傳病、傳染病和腫瘤的分子診斷上都有良好靈敏度和特異性，成功推動(dòng)熒光PCR這一“老技術(shù)”再上“新臺(tái)階”，填充了長(zhǎng)期存在于低階PCR和高通量檢測(cè)二者之間的技術(shù)空白。
